| 昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化 |
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| 引用本文： | 任卫青,张志平,许晓婷,邓立新,李小佳,吕婧玉,翟明胜,王新庄.昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化[J].畜牧兽医学报,2013(2):316-321. |
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| 作者姓名： | 任卫青 张志平 许晓婷 邓立新 李小佳 吕婧玉 翟明胜 王新庄 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院 |
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| 基金项目： | 河南省基础与前沿技术研究计划(092300410081);国家肉牛、牦牛产业体系(30300324) |
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| 摘 要： | 为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF+胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响。结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P<0.05)。囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P<0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P<0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率。所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点。由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养。
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| 关 键 词： | 胚胎干细胞 饲养层 培养液 优化 小鼠 |
Optimization of Culture System of Embryonic Stem Cells from Kunming Mouse |
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| REN Wei-qing,ZHANG Zhi-ping,XU Xiao-ting,DENG Li-xin,LI Xiao-jia,LV Jing-yu, ZHAI Ming-sheng,WANG Xin-zhuang.Optimization of Culture System of Embryonic Stem Cells from Kunming Mouse[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2013(2):316-321. |
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| Authors: | REN Wei-qing ZHANG Zhi-ping XU Xiao-ting DENG Li-xin LI Xiao-jia LV Jing-yu ZHAI Ming-sheng WANG Xin-zhuang |
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| Institution: | (College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002,China) |
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| Abstract: | |
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