| 猪源益生菌EP株突变株EP△asd的构建和初步应用 |
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| 引用本文： | 金铎,原志伟,单玉平,区炳明,羊扬,朱军,朱国强.猪源益生菌EP株突变株EP△asd的构建和初步应用[J].中国预防兽医学报,2018(1). |
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| 作者姓名： | 金铎 原志伟 单玉平 区炳明 羊扬 朱军 朱国强 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;中华人民共和国荣成出入境检验检疫局;江苏省连云港市畜牧兽医站; |
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| 摘 要： | 为研制更加安全的大肠杆菌疫苗株,并将其开发为新型活疫苗载体,本研究采用电转化将氯霉素抗性基因片段转化至益生菌EP株。采用同源重组技术使氯霉素抗性基因的PCR产物通过其两侧asd基因序列与益生菌EP基因组中的asd基因发生同源重组。通过氯霉素抗性平板筛选得到阳性克隆,对筛选得到的阳性克隆再导入编码Flp重组酶的质粒p CP20以去除抗性基因,从而构建成EP△asd突变株。该缺失突变株可以与表达链球菌asd基因的质粒形成功能性互补,转化有上述质粒的EP△asd突变株可长时间定居于仔猪肠道。本研究为进一步开发以益生菌EP△asd为染色体—质粒平衡致死系统宿主菌的用于预防仔猪肠道性传染病的细菌活载体疫苗研究奠定基础。
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