| 多杀性巴氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 许腾林,邢桂玲,刘家森,刘大飞,李志杰,姜骞,康洪涛,田进,郭东春,曲连东.多杀性巴氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].中国预防兽医学报,2018(8). |
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| 作者姓名： | 许腾林 邢桂玲 刘家森 刘大飞 李志杰 姜骞 康洪涛 田进 郭东春 曲连东 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;黑龙江八一农垦大学动物科技学院;东北农业大学动物科技学院 |
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| 摘 要： | 为建立一种多杀性巴氏杆菌(Pm)快速敏感的检测方法,本实验根据Pm70株kmt1基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并优化了检测反应条件。本实验建立的荧光定量PCR方法可以特异性检测Pm,而对鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等菌株检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法对C48-1株标准品的检测灵敏度为1.75×10~1拷贝/μL,优于常规PCR检测方法(1.75×10~3拷贝/μL) 100倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性。对20份疑似感染的临床病料样品(鸡肝脏、牛肺脏)进行增菌培养和分离鉴定,结果分离到8株多杀性巴氏杆菌;以建立的荧光定量PCR方法与常规PCR方法对增菌培养液进行检测,阳性率分别为40%(8/20)和25%(5/20),且荧光定量PCR方法与常规细菌分离鉴定的符合率为100%。对C48-1株感染致死的20份小鼠肝脏和脾脏组织研磨液进行检测,阳性率均为100%。本研究建立的方法能够快速、敏感的检测Pm,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。
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