| 甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SotSPSB的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 黄东亮,秦翠鲜,陈忠良,桂意云,李双喜,汪淼,廖青,李杨瑞.甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SotSPSB的克隆及原核表达[J].广西农业科学,2013(4):545-551. |
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| 作者姓名： | 黄东亮 秦翠鲜 陈忠良 桂意云 李双喜 汪淼 廖青 李杨瑞 |
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| 作者单位： | [1]广西农业科学院甘蔗研究所／广西甘蔗遗传改良重点实验室侬业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室 [2]中国农业科学院甘蔗研究中心 [3]广西农业科学院农业资源与环境研究所,南宁530007 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31160301）;广西自然科学基金项目（2011GXNSFF018002,2012GXNSFDA053011）;广西农业科学院基本科研业务专项项目（桂农科2011YZ06,桂农科2011YM05,桂农科2012YZ11,桂农科2012JM06） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆甘蔗B家族s0心PsB基因并进行原核表达，为进一步研究甘蔗SPS酶学特性及SPS活性调控机制奠定基础。【方法】在进化分析的基础上，通过同源克隆获得甘蔗SofSPSB基因部分序列，再结合RACE技术获得全长cDNA序列。扩增SofSPSB基因ORF并连到原核表达载体pETBlue－2上导入大肠杆菌BL21（DE3）中表达。【结果】通过比对B家族中进化关系很近的玉米（Zeamays）ZmSPS1和水稻（Oryzasativa）OsSPS1基因序列，并在保守区设计一对引物扩增获得甘蔗B家族SPS基因（SolSPSB）2330bp序列。结合5’－RACE和3’－RACE技术获得3481 bp SofSPSB基因全长cDNA序列，该序列包含一个3225bp的开放阅读框（0I江）；起始密码子（ATG）位于转录起始位点后56bp处，终止密码子（TGA）后有一段201bp的非编码序列，并带有真核生物典型的polyA尾巴；编码1074个氨基酸，SofSPSB与Zm—SPS1、OsSPS1的核苷酸序列同源性分别为94．7％和81．3％，氨基酸序列同源性分别为96．0％和83．9％；其理论分子量Mw=118．96kDa，等电点pI=6．30。经原核表达后纯化获得带6xHis标签的融合蛋白。【结论】克隆获得甘蔗B家族Sol-SPSB基因全长cDNA序列，成功构建了SoPSPSB基因原核表达载体，使其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。
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| 关 键 词： | 甘蔗 蔗糖磷酸合成酶 SofSPSB 克隆 原核表达 |
Cloning and prokaryotic expression of sucrose phosphate synthase gene （SoPSPSB） in sugarcane |
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| HUANG Dong-liang,QIN Cui-xian,CHEN Zhong-liang,GUI Yi-yun,LI Shuang-xi,WANG Miao,LIAO Qing,LI Yang-rui.Cloning and prokaryotic expression of sucrose phosphate synthase gene （SoPSPSB） in sugarcane[J].Guangxi Agricultural Sciences,2013(4):545-551. |
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| Authors: | HUANG Dong-liang QIN Cui-xian CHEN Zhong-liang GUI Yi-yun LI Shuang-xi WANG Miao LIAO Qing LI Yang-rui |
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| Institution: | 1Sugarcane Research Institute, Guangxi Academy of Agricultural Sciences/Guangxi Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement/Key Laboratory of Sugarcane Bioteehnology and Genetic Improvement (Guangxi), Ministry of Agricuhure Nanning 530007, China; 2Sugarcane Research Center, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, China; 3Agricultural Resources and Environment Research Institute, Guangxi Academy of Agrieuhural Sciences, Nanning 530007, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sugarcane B family sucrose phosphate synthase sucrose phosphate synthase gene cloning prokaryotic expression |
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