| 无血清分离昆明系小鼠胚胎干细胞 |
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| 引用本文： | 余树民,严兴荣,陈冬梅,王晗,窦忠英.无血清分离昆明系小鼠胚胎干细胞[J].中国兽医学报,2008,28(3):328-332. |
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| 作者姓名： | 余树民 严兴荣 陈冬梅 王晗 窦忠英 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,陕西,杨凌,712100;四川农业大学,动物科技学院,四川,雅安,625000
2. 西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,陕西,杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)
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教育部科学技术研究项目
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陕西省重大科技专项资助项目 |
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| 摘 要： | 以昆明系小鼠胚胎为研究材料,以丝裂霉素C处理的胎鼠成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEF）为饲养层,在胚胎干细胞（Embryonic stemcells,ESCs）培养液中添加血清替代物（Knockout serumreplacement,KSR）以替代胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）,并与添加FBS的培养液进行对比,研究了昆明系小鼠胚胎贴壁、ICM（Inner cell mass,ICM）集落形成以及ESCs分离的情况。结果表明,在添加KSR的培养液中,胚胎在培养3~5 d贴壁,胚胎贴壁率显著低于添加FBS的培养液;5~7 d形成ICM集落,集落未分化形态可维持2~3 d,培养10 d ICM集落仍可保持典型的未分化形态;ICM集落形成率和1代ESCs集落出现率与添加FBS的培养液相比差异不显著（P〉0.05）,但2~5代ESCs集落出现率显著高于添加FBS的培养液,其中有2株ESCs在添加KSR的培养液中传到7代;所分离细胞显示碱性磷酸酶染色强阳性,Oct-4、Nanog的免疫组化染色阳性,具有ESCs的特点。结论：在ESCs培养液中添加KSR比添加FBS更有利于维持ICM集落及ESCs的未分化状态。
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| 关 键 词： | 昆明系小鼠 胚胎 胚胎干细胞(ESCs) 内细胞团(ICM) 血清分离 昆明 小鼠胚胎干细胞 condition species Kunming mouse embryos embryonic stem cells culture 未分化状态 强阳性 免疫组化染色 Nanog 磷酸酶染色 碱性 显示 分离细胞 差异 液相比 出现率 |
| 文章编号： | 1005-4545(2008)03-0328-05 |
| 修稿时间： | 2007年5月11日 |
Isolation and culture of embryonic stem cells from mouse embryos of Kunming species in the serum-free condition |
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| YU Shu-min,YAN Xing-rong,CHEN Dong-mei,WANG Han,DOU Zhong-Ying.Isolation and culture of embryonic stem cells from mouse embryos of Kunming species in the serum-free condition[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2008,28(3):328-332. |
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| Authors: | YU Shu-min YAN Xing-rong CHEN Dong-mei WANG Han DOU Zhong-Ying |
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