| RNAi转基因大豆品系‘B5C9123-5’的RPA可视化检测技术 |
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| 引用本文： | 张晨,雷展,李凯,李飞武,商颖,许文涛.RNAi转基因大豆品系‘B5C9123-5’的RPA可视化检测技术[J].中国农业大学学报,2022,27(1):50-57. |
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| 作者姓名： | 张晨 雷展 李凯 李飞武 商颖 许文涛 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学 农业与食品学院, 昆明 650504;中国农业大学 食品科学与营养工程学院/北京食品营养与人类健康高精尖创新中心, 北京 100083; 农业农村部农业转基因生物安全评价(食用)重点实验室, 北京 100083;吉林省农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所, 长春 130033 |
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| 基金项目： | 转基因重大专项(2018ZX0801102B-001) |
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| 摘 要： | 为开发RNAi转基因作物的田间可视化鉴定方法，以DNA嵌合染料SYBR Green I为材料，采用设置重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)特异性引物的手段，建立了一种快速、低成本、可视化的RPA用于转基因大豆‘B5C9123-5’的检测。结果表明，在靶标不存在时，RPA体系中游离的SYBR Green I染料使溶液呈现较弱的黄色荧光。在靶标存在的情况下，RPA扩增产生的双链DNA与SYBR Green I结合导致溶液从黄色转变为绿色并使荧光迅速增强。通过对RPA扩增时间和温度进行优化，阳性结果可在20 min内用肉眼鉴别，检测限为1.00 ng/μL。通过设置不同RPA引物，该方法可用于现场快速检测多种RNAi转基因作物。
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| 关 键 词： | RNAi转基因作物 重组酶聚合酶扩增 可视化检测 SYBR Green I |
| 收稿时间： | 2021/2/3 0:00:00 |
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