| 利用微滴数字PCR技术分析转基因大豆‘GE-J12’中外源基因的拷贝数 |
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| 引用本文： | 赵新,刘双,刘娜,李瑞环,曹英芳,兰青阔,王永.利用微滴数字PCR技术分析转基因大豆‘GE-J12’中外源基因的拷贝数[J].中国农业大学学报,2022,27(1):58-66. |
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| 作者姓名： | 赵新 刘双 刘娜 李瑞环 曹英芳 兰青阔 王永 |
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| 作者单位： | 天津市农业科学院 生物技术研究所, 天津 300384;河北农业大学 食品科技学院, 河北 保定 071001 |
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| 基金项目： | 国家科技重大专项(2019ZX08004001-005) |
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| 摘 要： | 为鉴定抗除草剂转基因大豆新品种‘GE-J12’的外源基因插入拷贝数，以该转化体的外源插入目的基因G2-EPSPS和GAT的序列、3′转化体特异性序列为靶序列，设计PCR扩增引物和TaqMan探针，并对引物探针特异性进行鉴定，同时以大豆内标基因Lectin为参照，建立微滴数字PCR拷贝数检测体系。特异性试验结果显示，只有以抗除草剂转基因大豆‘GE-J12’基因组DNA为模板才有扩增信号。以单株转基因大豆‘GE-J12’基因组DNA为模板，进行外源目的基因G2-EPSPS和GAT、3′转化体特异性序列的微滴数字PCR检测，转基因大豆‘GE-J12’的外源目的基因G2-EPSPS和GAT在基因组上的插入拷贝数均值分别为0.99和1.01。同时3′转化体特异性序列的拷贝数均值为1.00，验证单株转基因大豆‘GE-J12’为纯合子，因此鉴定该单株转基因大豆‘GE-J12’的外源基因在大豆基因组上为单拷贝插入，同时与Southern blot方法进行比较，结果一致。
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| 关 键 词： | 拷贝数 微滴数字PCR 转基因大豆 外源基因 |
| 收稿时间： | 2021/1/6 0:00:00 |
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