微小隐孢子虫微线蛋白GP900与MDBK细胞互作蛋白的筛选 |
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引用本文: | 李明英,陈梦阁,李新,王晓岑,张西臣,宫鹏涛,张旭,李建华.微小隐孢子虫微线蛋白GP900与MDBK细胞互作蛋白的筛选[J].中国兽医学报,2023(3):526-531. |
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作者姓名: | 李明英 陈梦阁 李新 王晓岑 张西臣 宫鹏涛 张旭 李建华 |
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作者单位: | 吉林大学动物医学学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(31872465); |
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摘 要: | 通过筛选与微小隐孢子虫微线蛋白GP900相互作用的MDBK细胞蛋白,为进一步揭示微小隐孢子虫入侵宿主细胞的分子机制提供依据。首先构建重组原核表达质粒pGEX-4T-GP900,表达并纯化重组GP900蛋白;然后将重组GP900蛋白与MDBK细胞裂解液孵育,免疫共沉淀获得结合蛋白,质谱法分析与GP900互作的蛋白;最后用酵母双杂交进行验证。结果表明,成功构建pGEX-4T-GP900表达质粒,并纯化获得大小为43 kDa的重组GP900蛋白;免疫沉淀-质谱法筛选到2种与GP900相互作用的MDBK细胞蛋白,分别为膜联蛋白A2和热休克蛋白5;酵母双杂交技术验证了GP900与以上2种蛋白均有相互作用。为进一步阐明微小隐孢子虫入侵宿主细胞的分子机制奠定了基础。
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关 键 词: | 微小隐孢子虫 微线蛋白GP900 细胞受体 免疫沉淀-质谱法 酵母双杂交 |
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