| 干扰素诱导跨膜蛋白3基因敲除Caco2细胞株的构建及其对水泡性口炎病毒复制的影响 |
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| 引用本文： | 庞照霞,郝鹏飞,屈巧巧,李乐天,李昌,金宁一.干扰素诱导跨膜蛋白3基因敲除Caco2细胞株的构建及其对水泡性口炎病毒复制的影响[J].中国兽医学报,2023(3):476-482. |
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| 作者姓名： | 庞照霞 郝鹏飞 屈巧巧 李乐天 李昌 金宁一 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学学院;2. 中国农业科学院长春兽医研究所 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划资助项目(2021YFD1801103-6)； |
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| 摘 要： | 通过CRISPR/Cas9系统，旨在构建干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)基因敲除的人结直肠腺癌细胞Caco2,并探究IFITM3基因敲除对水泡性口炎病毒(VSV)复制的影响。针对人IFITM3基因靶向设计sgRNA,合成后连接至pLentiv2载体中获得重组质粒，经测序后将正确连接sgRNA的重组质粒及辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装并感染Caco2细胞，然后进行嘌呤霉素加压筛选，利用有限稀释法获取IFITM3基因敲除单克隆细胞。利用DNA测序和Western blot对所获得单细胞克隆进行鉴定，鉴定正确的细胞命名为Caco2-△IFITM3。用表达绿色荧光蛋白的VSV(VSV-EGFP)感染Caco2-△IFITM3细胞，通过荧光显微镜观察IFITM3敲除对VSV复制的影响。基因组DNA测序结果表明，在IFITM3基因开放阅读框产生了碱基缺失，细胞中IFITM3蛋白表达消失，但细胞活性未受明显影响。病毒感染试验可观察到Caco2-△IFITM3细胞感染比例显著高于Caco2细胞，表明敲除IFITM3使其抗病毒功能减弱。本研究通过CRISPR/Ca...
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| 关 键 词： | 干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3) CRISPR/Cas9 Caco2细胞 水泡性口炎病毒(VSV) |
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