| 微滴式数字PCR定量检测禽脑脊髓炎病毒方法的建立 |
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| 引用本文： | 谢志勤,谢芝勋,张艳芳,范晴,谢丽基,万丽军,罗思思,李孟,张民秀,曾婷婷,黄娇玲,王盛,李丹,韦悠,李小凤,任红玉,阮志华.微滴式数字PCR定量检测禽脑脊髓炎病毒方法的建立[J].中国兽医学报,2023(4):668-673+719. |
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| 作者姓名： | 谢志勤 谢芝勋 张艳芳 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 李小凤 任红玉 阮志华 |
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| 作者单位： | 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室农业农村部中国-东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室 |
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| 基金项目： | 广西重点研发计划资助项目（桂科AB16380003）； |
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| 摘 要： | 旨在建立微滴式数字PCR(ddPCR)检测禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus, AEV)的方法，并实现对AEV绝对定量检测。根据已发表的AEV的VP1基因为靶序列，在其保守区域内设计了特异性扩增的引物和探针序列，应用合成的引物和探针建立ddPCR检测AEV方法，并测定其特异性、灵敏性和重复性。结果显示，建立方法的最佳引物终浓度为1.0μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L,退火温度为58℃。特异性测试结果，本方法只检出AEV,没有检出禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽呼肠孤病毒、禽偏肺炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒，且无交叉反应。灵敏性结果显示，本方法对pMD18-AEV重组质粒DNA最低检测限为5.9拷贝/μL,敏感性高。用4个连续稀释的pMD18-AEV重组质粒DNA的拷贝数的对数值与ddPCR检测的拷贝数的对数值绘制绝对定量曲线，其曲线呈良好的线性关系(R2=0.999 4),结果稳定。3次重复检测结果的变异系数均小于5%,重复性好。对采集的病鸡临床样品65份进行ddPCR和荧光定量PCR检测，结果...
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| 关 键 词： | 微滴式数字PCR 禽脑脊髓炎病毒 VP1基因 |
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