| 猪瘟病毒E0+E2基因的串联表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 向蕊,朱利塞,陶攀,白挨泉,王贵平,贾爱卿.猪瘟病毒E0+E2基因的串联表达及多克隆抗体制备[J].中国兽医学报,2023(1):35-40. |
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| 作者姓名： | 向蕊 朱利塞 陶攀 白挨泉 王贵平 贾爱卿 |
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| 作者单位： | 1. 佛山科学技术学院;2. 广东海大畜牧兽医研究院;3. 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室 |
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| 基金项目： | 广州市科学研究计划重点资助项目(201804020006)；;广东省重点领域研发计划资助项目(2019B020218004)； |
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| 摘 要： | 串联表达猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)E0和E2蛋白，并制备多克隆抗体鉴定其免疫原性，为进一步研究亚单位疫苗和猪瘟ELISA抗体检测方法提供材料。应用PCR技术分别扩增CSFV E0和E2基因片段，运用重叠PCR将其串联扩增后克隆至pET-28a载体，构建重组表达质粒pET-28a-E0+E2。通过大肠杆菌表达系统表达重组蛋白E0+E2,切胶纯化后免疫昆明小鼠制备血清，通过间接ELISA方法测定抗体水平，间接免疫荧光(IFA)分析多克隆抗体的免疫原性和特异性。结果显示，37℃,1 mmol/L IPTG诱导条件下，E0+E2蛋白能够以包涵体形式表达，经纯化复性后免疫小鼠，制备的血清能与感染CSFV的细胞特异性反应。在大肠杆菌中高效表达了E0+E2蛋白，制备的多克隆抗体具有较高的特异性和反应性。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 E2蛋白 E0蛋白 串联表达 多克隆抗体 |
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