| 牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 赵润涛,王旭芬,侯琳,张贺,赵洋,张志丹,周伟光.牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医学报,2023(1):66-71. |
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| 作者姓名： | 赵润涛 王旭芬 侯琳 张贺 赵洋 张志丹 周伟光 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室 |
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| 摘 要： | 牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV)是国内近几年发现的引起犊牛腹泻的新病原，为了建立快速、准确且能定量分析BNeV的检测方法，本试验根据GenBank上发布的BNeV聚合酶基因(RdRp)序列设计合成了1对特异性引物和1条探针，并通过优化反应体系，成功建立了BNeV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法并对临床样品进行检测。结果表示，该方法最佳上下游引物浓度均为500 nmol/L,探针浓度为400 nmol/L,在1×108～1×101拷贝/μL之间呈现良好的线性关系，线性相关系数R2=0.996,扩增效率为105.9%;该方法特异性较强，在多个犊牛腹泻相关病原中，只检测出BNeV;敏感性较高，对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×101拷贝/μL,而普通PCR对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×103拷贝/μL;重复性较好，组内变异系数和组间变异系数均小于3%;对2021年3-5月采自内蒙古地区牧场的37份犊牛粪样中BNeV的检出率为35.1%,...
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| 关 键 词： | 牛纽布病毒 荧光定量RT-PCR 犊牛腹泻 特异性 敏感性 重复性 |
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