| 牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立 |
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| 引用本文： | 李兆利,薛飞,朱远茂,王延辉.牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立[J].畜牧兽医学报,2006,37(12):1328-1333. |
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| 作者姓名： | 李兆利 薛飞 朱远茂 王延辉 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;中国农业科学院研究生院,北京,100081
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | “863”计划（2003AA41110）;黑龙江省重大攻关项目（GA028501） |
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| 摘 要： | 经DNAstar分析，据牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）全基因序列设计合成gB基因的特异性引物，以构建的pGM-T-gB为模板，PCR扩增IBRVgB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆，酶切鉴定并测序鉴定后，定向插入pET32a表达载体中，转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明，诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在，大小约为29．2ku，与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2．000mg／mL，纯度为79．2％。间接ELISA检测证明，表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原，建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50／zg／mL，血清的最佳稀释度为1：40，阳性标准定为s／e〉0．395。交叉试验表明对牛流热（BEV）、牛肺疫（CBPP）、牛病毒性腹泻（BVD）、牛结核（BTB）、牛副结核（PBB）以及牛赤羽病（BAD）等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较，特异性、敏感性和符合率分别为83．3％、90．9％和88．9％；与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较，特异性、敏感性和符合率分别为92％、92．7％和92．5％。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性，显示了良好的应用前景。
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| 关 键 词： | IBRV gB基因 表达 纯化 间接ELISA |
| 文章编号： | 0366-6964（2006）12-1328-06 |
| 收稿时间： | 2006-03-01 |
| 修稿时间： | 2006-03-01 |
An Indirect ELISA for Detection of Antibody against Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus Using Recombinant Truncated Glycoprotein B Expressed in E. coli |
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| LI Zhao-li,XUE Fei,ZHU Yuan-mao,WANG Yan-hui.An Indirect ELISA for Detection of Antibody against Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus Using Recombinant Truncated Glycoprotein B Expressed in E. coli[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2006,37(12):1328-1333. |
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| Authors: | LI Zhao-li XUE Fei ZHU Yuan-mao WANG Yan-hui |
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| Institution: | 1. Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001 ,China;2, Graduate School,Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | infectious bovine rhinotracheitis virus glycoprotein B gene expression purification indirect enzyme-linked immunosorbent assay |
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