| 猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 胡慧,邱昌庆,张彦明.猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达[J].中国兽医科技,2004,34(1):3-7. |
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| 作者姓名： | 胡慧 邱昌庆 张彦明 |
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| 作者单位： | [1]西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌712100 [2]中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州730046 |
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| 摘 要： | 用RT-PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株(Shimen)、近期地方流行的属于第1群毒株的新疆毒株(XJ)和第2群代表毒株甘肃临洮(LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增，均得到约561bp的基因片段；经克隆测序及序列分析，该基因编码187个氨基酸残基，预计蛋白分子质量为21.7ku。将这4个基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中，阅读框是正确的，从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中，用异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达，对表达的蛋白用SDSPAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明，E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达，表达的蛋白多以包涵体形式存在，表达产物的分子质量约为50．0ku，与理论推测的分子质量一致；薄层凝胶扫描分析表明。表达蛋白约占菌体蛋白总量的20．1％；免疫印迹结果证明，表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 E2基因 抗原区 原核表达 载体 基因片段 克隆测序 序列分析 氨基酸残基 重组质粒 包涵体 菌体蛋白 |
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