| 乙型脑炎病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究 |
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| 引用本文： | 王帅涛,王新卫,陈陆,赵军,常洪涛,杨霞,刘红英,王川庆.乙型脑炎病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究[J].中国兽医学报,2013,33(6). |
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| 作者姓名： | 王帅涛 王新卫 陈陆 赵军 常洪涛 杨霞 刘红英 王川庆 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州,450002 |
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| 基金项目： | 河南省高校科技创新人才支持计划资助项目 |
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| 摘 要： | 根据乙型脑炎病毒(JEV)NS3基因保守序列设计并合成一对引物,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测JEV的SYBR Green I荧光定量PCR方法.该方法在1.92×108～1.92×101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中19拷贝/μL的病毒核酸,敏感性是常规RT-PCR方法的10倍;检测时间缩短了50％,该方法不与其它猪源病毒发生交叉反应;在重复性试验中,批间、批内变异系数均小于1.2％.应用本方法对JEV在BHK-21细胞上繁殖滴度进行定量检测,绘制JEV在BHK-21细胞上的一步生长曲线,并与TCID50方法绘制的复制动态曲线进行比较.结果显示,两种方法测定的JEV在BHK-21细胞上的复制动态具有一定的平行关系,对于制备灭活疫苗而言,荧光定量PCR方法更快速和敏感,所测得的抗原含量更精确,有利于企业机动灵活地安排生产.
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| 关 键 词： | 乙型脑炎病毒 荧光定量PCR 一步生长曲线 TCID50 |
Proliferation dynamic of Japanese encephalitis virus in vitro using a newly developed fluorescent quantitative PCR assay |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Japanese encephalitis virus fluorescent quantitative PCR one-step growth curve TCID50 |
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