| 犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用 |
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| 引用本文： | 贾启恒,温洁霞,王利月,林洪羽,张峰,王璐,孙岩,李秀锦,仲飞.犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用[J].中国兽医学报,2013,33(5). |
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| 作者姓名： | 贾启恒 温洁霞 王利月 林洪羽 张峰 王璐 孙岩 李秀锦 仲飞 |
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| 作者单位： | 1. 河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站/河北省兽用生物制品工程技术研究中心,河北保定,071001
2. 燕山大学环境与化学工程学院,河北秦皇岛,066004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，河北省自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白.利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应.为进一步提高VP2 DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因作为生物佐剂研究其对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用.首先通过RT-PCR方法从犬淋巴细胞中扩增GM-CSF基因,并将其插入到pcDNA3.1栽体上,分别构建该基因的两个分泌型真核表达载体,即非融合表达载体pcDNA-cGMCSF和与Myc His融合的表达栽体pcDNA-cGMCSF/MH.用pcDNA-cGMCSF/MH载体转染HEK293T细胞以确定GM-CSF基因能否在真核细胞中进行分泌表达.然后用本室构建的VP2基因表达栽体单免疫小鼠,用VP2表达载体与pcDNA-cGMCSF共免疫小鼠(pcDNA3.1空载体作为阴性对照).免疫后用ELISA方法检测不同时间小鼠血清的抗体水平.用MTT法检测小鼠免疫后35 d时淋巴细胞的增殖活性,同时用ELISA试剂盒检测小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平.结果表明,本试验构建的表达载体能够介导重组GM-CSF在真核细胞中进行分泌表达.免疫实验表明,利用GM-CSF基因与VP2基因共免疫小鼠,抗体的水平明显高于VP2基因单免疫组(P＜0.01).共免疫组小鼠淋巴细胞的刺激指数和γ干扰素的表达水平均明显高于单免疫组(P＜0.05).由此可见,GM-CSF表达载体可明显提高CPV VP2 DNA疫苗的免疫应答水平.
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| 关 键 词： | GM-CSF 免疫佐剂 VP2基因疫苗 犬细小病毒 |
Canine GM-CSF gene enhances the immunogenic potency of canine parvovirus VP2 DNA vaccine |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GM-CSF adjuvant VP2 gene DNA vaccine canine parvovirus |
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