| 双价苏云金芽孢杆菌cry基因载体构建及其在大肠杆菌中表达杀虫活性 |
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| 引用本文： | 陈中义,李丽华,张杰,管宇,吴限,韩岚岚,黄大昉.双价苏云金芽孢杆菌cry基因载体构建及其在大肠杆菌中表达杀虫活性[J].农业生物技术学报,2002,10(3):272-277. |
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| 作者姓名： | 陈中义 李丽华 张杰 管宇 吴限 韩岚岚 黄大昉 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094
2. 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094;中国农业科学院生物技术研究所,北京,100081 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(39870497)资助. |
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| 摘 要： | 研究和利用不同苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫蛋白之间的增效作用是构建高效遗传工程虫剂，预防和延缓害虫抗性的重要途径。BtCry1Ab,Cry1Ac和Cry2Aa蛋白对重要的鳞翅目农业害虫具有主毒力，质粒pHT-BSK含有能在大肠杆菌（Echerichia coli)－枯草芽孢杆菌（B.subtilis)有效表达的生物安全性标记基因卡那霉素抗性基因。将含Btcry1A,cry1Ac和cry2Aa全长基因的Bam HI/PstI,Bam H I/Xho I和Sma I(Bam H I)HindⅢDNA片段与pHT-BSK的应酶切产物连接，获得了单价cry/km^r组合的重组质粒pBlue-1Ab-km^r,pBlue-1Ab和pHT-2Aa;cry1Ab,cry1Ac DNA片段与pHT-2Aa相应酶切产物相连接获得了Bt双价基因／km^r组合重组质粒pBlue-crylAb-km^r-2Aa和pBlue-cry1Ac-km^4-2Aa，重组质粒中所有cry基因与km^r均形成特异的Bam H I片段。限制酶切电泳分析和特异PCR扩增证实了重组质粒的准确连接。含有重组质粒的大肠杆菌显示了对小菜蛾（Plutella xylostella）和玉米暝（Ostrinia furnacalis)的杀虫活性，对小菜蛾双价基因毒力高于单价基因，但对玉米螟它们之间没有明显差异。研究为进一步阐明Bt cry 2Aa与cry1Ab和cry 1Ac之间在不同微生物细胞中的共表达及其表达产物之间的相互作用和构建双价基因杀虫工程菌株创造了条件。
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| 关 键 词： | 双价苏云金芽孢杆菌 cry基因载体 大肠杆菌 表达 杀虫活性 |
| 修稿时间： | 2001年3月30日 |
Construction of Recombined Plasmid Carrying Two Bacillus thuringiensis cry Genes with Kanamycin Resistant Gene and Bioassay of Their Co-expression Insecticidal Activities in Escherichia coli |
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