| SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法检测猪细小病毒 |
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| 引用本文： | 陈坚,刘业兵,张志刚,姜晓晨,张晓杰.SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法检测猪细小病毒[J].中国兽医杂志,2011,47(8). |
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| 作者姓名： | 陈坚 刘业兵 张志刚 姜晓晨 张晓杰 |
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| 作者单位： | 1. 中国兽医药品监察所,北京海淀100081;广东永顺生物制药有限公司,广东广州511356
2. 中国兽医药品监察所,北京海淀,100081 |
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| 基金项目： | 2010年公益性行业(农业)科研专项(201003010-3); “十一五”国家科技支撑计划(2007BAD86B04-4) |
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| 摘 要： | 为建立特异敏感的猪细小病毒(PPV)的SYBR Green I实时定量PCR检测方法,本研究根据GenBank上PPV NS1保守序列设计合成了1对引物,利用本实验室构建的重组质粒(pMD18-T-PPV NS1)为标准模板,对反应条件进行优化,绘制标准曲线,并进行熔解曲线分析,建立了PPV的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法.分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明,本方法具有良好的特异性,与PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、SIV及阴性对照均为阴性;其最低检出量为7copies/μL,比PCR敏感100倍,且批内和批间重复性良好.用该方法对15份临床病料进行检测,并与常规PCR、环介导等温扩增(LAMP)方法进行对比,显示该方法灵敏度高、成本低,能够对样品组织中病毒进行定量检测,为快速检测PPV提供了有效的技术手段.
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| 关 键 词： | 猪细小病毒 SYBR Green I实时定量PCR 检测 |
Establishment of SYBR Green I real-time PCR assay for the detection of porcine parvovirus |
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| CHEN Jian,LIU Ye-bing,ZHANG Zhi-gang,JIANG Xiao-chen,ZHANG Xiao-jie.Establishment of SYBR Green I real-time PCR assay for the detection of porcine parvovirus[J].Chinese Journal of Veterinary Medicine,2011,47(8). |
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| Authors: | CHEN Jian LIU Ye-bing ZHANG Zhi-gang JIANG Xiao-chen ZHANG Xiao-jie |
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| Institution: | CHEN Jian1,2,LIU Ye-bing1,ZHANG Zhi-gang1,JIANG Xiao-chen1,ZHANG Xiao-jie1(1.China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081,China,2.Guangdong Winsun Bio-Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangzhou 511356,China) |
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