| 野生小果油茶ISSR-PCR反应体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 李国帅,曹福祥,彭继庆,胥文,胡双喜,彭滟钞.野生小果油茶ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J].中南林业科技大学学报,2014(4):36-42,49. |
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| 作者姓名： | 李国帅 曹福祥 彭继庆 胥文 胡双喜 彭滟钞 |
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| 作者单位： | 中南林业科技大学; |
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| 基金项目： | “生物化学与分子生物学”校级重点学科基金(066) |
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| 摘 要： | 为建立一个具有良好稳定性和可重复性的野生小果油茶ISSR-PCR反应体系,以提取的野生小果油茶总DNA为供试材料,利用单因素试验,正交试验设计L16(45)和方差分析对DNA模板的量,引物浓度,dNTPs浓度,Mg2+浓度,Taq DNA聚合酶的量5个影响ISSR-PCR反应体系的因素进行优化研究。确定野生小果油茶ISSRPCR最优反应体系为:在20μL的反应体系中,DNA模板为30 ng,引物浓度为0.7μmol/L,dNTPs浓度为0.25mmol/L,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶的量为1.75 U。方差分析结果表明,5个因素对体系的影响均未达到显著水平,其中引物浓度对反应体系影响最大。应用建立的体系对5份野生小果油茶样品进行扩增,证明了该体系具有稳定性和可重复性。
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| 关 键 词： | 野生小果油茶 ISSR-PCR 单因素实验 正交试验设计 |
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