| 不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选 |
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| 引用本文： | 钱瑜,刘同坤,侯喜林,李英.不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选[J].南京农业大学学报,2015,38(1):21-26. |
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| 作者姓名： | 钱瑜 刘同坤 侯喜林 李英 |
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| 作者单位： | 南京农业大学园艺学院 |
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| 摘 要： | 目的]构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库,筛选与细胞色素C还原酶铁硫蛋白(BcRISP1)互作的蛋白.方法]从不结球白菜Pol胞质雄性不育花中提取总RNA,通过长距离PCR,扩增双链cDNA(ds cDNA).采用SMART建库技术构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花全长cDNA文库.利用BcRISP1基因的开放阅读框,构建诱饵表达载体pGBK T-7-BcRISP1转化AH109酵母菌,根据酵母双杂交技术筛选出与BcRISP1互作的片段,并进行质粒共转化验证.结果]经检测,文库的转化率为每μg pGADT7-Rec 1.80× 106转化子,文库滴度为1.21×107 CFU·mL-1,重组率为94％,成功构建可以用于酵母双杂交的cDNA文库.酵母双杂交技术获得了与BcRISP1互作的阳性克隆,试验表明诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用,质粒共转化试验初步验证了BcRISP1与CYP81G、PIP2蛋白的互作关系.结论]cDNA文库的成功构建为后期互作蛋白的顺利筛选奠定了基础,利用酵母双杂交技术成功获得与BcRISPl互作的蛋白CYP81G和PIP2,为明确不结球白菜Pol胞质雄性不育相关基因的信号传递通路提供更多的依据,以期从分子水平上进一步阐明不结球白菜Pol胞质雄性不育的机制.
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| 关 键 词： | 不结球白菜 Pol胞质雄性不育(Pol CMS) 酵母双杂交 |
Construction and screening of yeast two hybrid cDNA library of non-heading Chinese cabbage flowers with Pol CMS |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | non-heading Chinese cabbage Pol cytoplasmic male sterility(Pol CMS) yeast two hybrid |
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