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| 鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量PCR方法的优化 | |
| 引用本文： | 彭珊,闫丽萍,李国新,李雪松,滕巧泱,肖亚莉,何文兴,李泽君.鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量PCR方法的优化[J].中国预防兽医学报,2013,35(4):294-298. |
| 作者姓名： | 彭珊 闫丽萍 李国新 李雪松 滕巧泱 肖亚莉 何文兴 李泽君 |
| 作者单位： | 1. 济南大学化学化工学院,山东济南250022;中国农业科学院上海兽医研究所禽病实验室,上海200241 2. 中国农业科学院上海兽医研究所禽病实验室,上海,200241 3. 济南大学化学化工学院,山东济南,250022 |
| 基金项目： | 公益性行业(农业)科研专项经费项目，国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 为提高鸭坦布苏病毒(DTMUV)TaqMan荧光定量PCR方法的敏感性和简化反应条件,本研究在前期建立的TaqMan荧光定量PCR方法的基础上,设计一条特异性的反转录引物,优化反应体系,建立了简便、快速、敏感的TaqMan荧光定量PCR方法。该荧光定量PCR方法最低检测限为10拷贝,敏感性是未优化的荧光定量PCR方法的5倍、是普通PCR方法的100倍,并且该方法对DTMUV的最低检测限是0.01半数鸡胚致死量(ELD50)。通过批内和批间实验的变异系数表明优化的荧光定量PCR方法的重复性比未优化的荧光定量PCR方法好。通过该优化的荧光定量PCR方法检测其它常见的鸭病病毒的DNAs或RNAs,证明了该方法特异性好。对现地60份疑似DTMUV的样品进行检测,用该方法检出57份样品为阳性,明显高于普通PCR,并且在区分35Ct值左右样品试验中敏感性优于未优化的荧光定量PCR方法。该优化的DTMUV TaqMan荧光定量PCR方法更适用于DTMUV的快速定量流行病学诊断。 |
| 关 键 词： | 鸭坦布苏病毒 荧光定量PCR TaqMan荧光探针 |
Optimization of TaqMan-based real-time PCR assay for detection of duck Tembusu virus |
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| PENG Shan,YAN Li-ping,LI Guo-xin,LI Xue-song,TENG Qiao-yang,XIAO Ya-li,HE Wen-xing,LI Ze-jun.Optimization of TaqMan-based real-time PCR assay for detection of duck Tembusu virus[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2013,35(4):294-298. | |
| Authors: | PENG Shan YAN Li-ping LI Guo-xin LI Xue-song TENG Qiao-yang XIAO Ya-li HE Wen-xing LI Ze-jun |
| Institution: | 1.College of Chemistry and Chemical Engineering,Ji’nan University,Ji’nan 250022,China;2.Avian Diseases Laboratory,Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Shanghai 200241,China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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