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葡萄广谱抗病毒RNAi载体构建及对合子胚起源的体细胞胚的遗传转化
摘    要:病毒病对世界葡萄生产危害严重。为创制广谱抗病毒植物新材料,本研究采用RT-PCR分别克隆获得了葡萄扇叶病毒、葡萄卷叶病毒、葡萄病毒A和葡萄病毒B的外壳蛋白基因保守片段,用重叠延伸PCR方法串联获得了825 bp的大片段"GV",以此串联基因片段用作干扰片段,采用Gateway技术构建了同时含有4种病毒CP基因片段的RNAi植物表达载体"Ph12-GV",冻融交替法将其转入农杆菌菌株EHA105中。采用根癌农杆菌介导法遗传转化"红宝石无核"葡萄合子胚诱导发生的体细胞胚,RT-PCR的检测结果显示,目的基因片段成功转入葡萄中并在RNA水平上得到表达。

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