| Oenococcus oeni MLF关键基因在酿酒酵母中的转化与表达 |
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| 引用本文： | 刘延林,蒋思欣,李华,何秀萍,张博润.Oenococcus oeni MLF关键基因在酿酒酵母中的转化与表达[J].农业生物技术学报,2006,14(4):606-611. |
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| 作者姓名： | 刘延林 蒋思欣 李华 何秀萍 张博润 |
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| 作者单位： | 西北农林大学葡萄酒学院，杨凌 1西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西杨凌 |
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| 摘 要： | 利用西北农林科技大学葡萄酒学院筛选出的酒酒球菌(Oenococcus oeni )优良菌系SD-2a的包含苹果酸-乳酸酶基因(mleA)和苹果酸通透酶基因(mleP )约2.6 kb的基因片段，并以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件，以酵母-大肠杆菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleAP，转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58，筛选获得酵母转化子YS58/pYELmleAP。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中，SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了苹果酸-乳酸酶的目的蛋白。对酵母转化子培养上清进行HPLC检测，采用t检验差异显著性分析，结果表明mleA基因在受体菌中进行了功能性表达。获得的酵母转化子在添加L-苹果酸的SD/-Ura培养基中培养4 d，培养液中的L-苹果酸含量降低，培养液上清中L-苹果酸的剩余含量比空载体转化子极显著降低，苹果酸降低19.33%～19.42%。对照未检出乳酸的生成，供试的转化子L-乳酸生成量为1249～1368 mg/L，与对照差异显著。
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| 收稿时间： | 2005-7-11 |
| 修稿时间： | 2006-5-19 |
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