| 牛源化脓隐秘杆菌溶血素的重组表达及其间接ELISA检测方法的建立 |
| |
| 引用本文： | 赵宇,周思旋,卢昱希,张涛,唐远江,陶小艳,赵春萍,黄波,武俊达,史开志.牛源化脓隐秘杆菌溶血素的重组表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医,2022(20):75-80. |
| |
| 作者姓名： | 赵宇 周思旋 卢昱希 张涛 唐远江 陶小艳 赵春萍 黄波 武俊达 史开志 |
| |
| 作者单位： | 贵州省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| |
| 基金项目： | 贵州省科技计划项目“规模化牛场肺部炎症性疾病成因与防控技术应用研究”(黔科合支撑[2019]2275号)； |
| |
| 摘 要： | 为了建立检测牛源化脓隐秘杆菌抗体的间接ELISA检测方法，试验对分离的牛源化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin, PLO)基因序列进行分析，截去信号肽与跨膜区域后进行碱基优化，合成PLO基因片段，连接至原核表达载体pET-30a中，转化至Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态后诱导表达并纯化，以纯化后的重组蛋白作为抗原包被96孔板，建立牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体间接ELISA检测方法，确定检测方法的临界值、特异性、敏感性、重复性，并用建立的方法对临床血清样本进行检测。结果表明：成功构建了重组原核表达质粒pET30a-PLO,实现了重组蛋白在Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态中的表达，并建立了用于检测牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体的间接ELISA检测方法。该检测方法的临界值为0.354,与常见牛细菌阳性血清无交叉反应，阳性血清稀释至320倍检测仍高于临界值；批内、批间检测变异系数均小于5%;对10份已知阳性血清进行检测，阳性检出率为100%,80份临床牛血清的阳性检出率为21.25%(17/80)。说明该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性，可用于牛源化脓隐秘...
|
| 关 键 词： | 牛 化脓隐秘杆菌 溶血素蛋白 原核表达 间接ELISA 抗体 |
|
|
