| 西伯利亚鲟MHCⅡβ克隆、原核表达和多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 田照辉,胡红霞,王巍,东天,孙爱.西伯利亚鲟MHCⅡβ克隆、原核表达和多克隆抗体制备[J].江苏农业科学,2022(20):201-206. |
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| 作者姓名： | 田照辉 胡红霞 王巍 东天 孙爱 |
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| 作者单位： | 北京农林科学院水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系北京市鲟鱼、鲑鳟鱼创新团队项目(编号：BAIC08—2018)； |
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| 摘 要： | 旨在构建西伯利亚鲟(Acipenser baerii)MHCⅡβ基因原核表达载体高效表达，并进行多克隆抗体的制备。根据GenBank西伯利亚鲟MHCⅡβ基因序列设计引物，并加上6-His标签和酶切位点，从西伯利亚鲟脾脏细胞中克隆可读编码框(不含信号肽)部分，克隆并测序鉴定后构建Pet30α-MHCⅡβ质粒，转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷IPTG诱导表达，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western Blot)鉴定，诱导表达的融合蛋白大小约为32 ku,能够与His抗体结合，融合蛋白主要以包涵体形式存在，在温度37℃时1 mmol/L的IPTG诱导4 h可以达到最佳表达量。将表达蛋白通过镍柱层析纯化后，制备兔多克隆抗体，抗体效价达到243 W,为深入研究西伯利亚鲟MHCⅡβ基因免疫学功能提供参考。
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| 关 键 词： | 西伯利亚鲟 MHCⅡβ基因 原核表达 多克隆抗体 |
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