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| 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析 | |
| 引用本文： | 王劭,朱小丽,朱晓琳,陈少莺,林锋强,陈仕龙,程晓霞,李兆龙,江斌.猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析[J].农业生物技术学报,2013,21(1):112-119. |
| 作者姓名： | 王劭 朱小丽 朱晓琳 陈少莺 林锋强 陈仕龙 程晓霞 李兆龙 江斌 |
| 作者单位： | 1. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013 2. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 3. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所;福建农林大学动物科学学院,福州350002 |
| 基金项目： | 福建省农科院创新团队项目，福建省公益类科研院所专项 |
| 摘 要： | 猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株N基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株N基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%～99.8%,氨基酸同源性为96.1%～100%。TGEV-FJ株N基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Western blot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Sus scrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。 |
| 关 键 词： | 猪 传染性胃肠炎病毒(TGEV) TGEV-福建(Fujian)分离株 核衣壳蛋白 N基因 原核表达 |
Cloning and Expression Analysis of Nucleocapsid Protein-encoding Gene (N) from Porcine Transmissible gastroenteritis virus(TGEV) Fujian Strain |
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| WANG Shao , ZHU Xiao-Li , ZHU Xiao-Lin , CHEN Shao-Ying , LIN Feng-Qian , CHEN Shi-Long , CHENG Xiao-Xia , LI Zhao-Long , JIANG Bin.Cloning and Expression Analysis of Nucleocapsid Protein-encoding Gene (N) from Porcine Transmissible gastroenteritis virus(TGEV) Fujian Strain[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2013,21(1):112-119. | |
| Authors: | WANG Shao ZHU Xiao-Li ZHU Xiao-Lin CHEN Shao-Ying LIN Feng-Qian CHEN Shi-Long CHENG Xiao-Xia LI Zhao-Long JIANG Bin |
| Institution: | 1,2 1 Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Fujian Academy of Agriculture Sciences;2 Fujian Animal Diseases Control Technology Development Center,Fuzhou 350013,China;3 College of Animal Science,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350002,China |
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| Keywords: | |
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