| 籽用西瓜SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选 |
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| 引用本文： | 杨 静,王 萍,石 磊.籽用西瓜SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选[J].西北农业学报,2016,25(6):889-896. |
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| 作者姓名： | 杨 静 王 萍 石 磊 |
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| 作者单位： | (内蒙古农业大学 农学院,内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室,呼和浩特 010019) |
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| 基金项目： | 内蒙古自然科学基金（2016MS0356）；内蒙古科技计划项目(20090707,2010704,20110711,20120212);内蒙古高寒地区高产安全蔬菜生产的研究与创新项目（NDPYTD2013-3）。 |
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| 摘 要： | 采用L_(25)(5~6)正交试验设计,对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的5个因素(Taq酶用量、Mg~(2+)浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了籽用西瓜SCoT-PCR反应体系:Mg~(2+)2.5mmol·L~(-1)、dNTPs 0.15mmol·L~(-1)、Taq酶1.5U、引物0.5μmol·L~(-1)、模板DNA 20ng,总体积20μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg~(2+)浓度的影响最大,Taq酶用量的影响最小。应用22个籽用西瓜品种验证该体系稳定可靠,并从41个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的22个引物,并逐一筛选出最适退火温度。该反应体系的建立为今后利用SCoT标记技术对籽用西瓜种质遗传多样性评价、指纹图谱构建、种质鉴定、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段。
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| 关 键 词： | 籽用西瓜 SCoT-PCR 体系优化 正交设计 |
Optimization for SCoT-PCR System and Primer Selection of Seed-used Watermelon |
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| YANG Jing,WANG Ping and SHI Lei.Optimization for SCoT-PCR System and Primer Selection of Seed-used Watermelon[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2016,25(6):889-896. |
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| Authors: | YANG Jing WANG Ping and SHI Lei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Seed-used watermelon SCoT-PCR Reaction optimization Orthogonal design |
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