| 番木瓜环斑病毒弱毒株的构建及分析 |
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| 引用本文： | 付兰兰,庹德财,沈文涛,言普,黎小瑛,周鹏.番木瓜环斑病毒弱毒株的构建及分析[J].热带作物学报,2016,37(12):2366-2375. |
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| 作者姓名： | 付兰兰 庹德财 沈文涛 言普 黎小瑛 周鹏 |
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| 作者单位： | 1. 海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口 571101;2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口,571101 |
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| 基金项目： | 2015年海南省科协青年科技英才创新计划（No. 201511）。 |
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| 摘 要： | 弱毒株是利用交叉保护防治植物病毒病害的关键限制因子。通过对马铃薯Y病毒属病毒(强、弱毒株)的全长及部分氨基酸序列比对分析,筛选出在亲本强毒株PRSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8个可能与致病性相关的氨基酸突变位点(I_(309)、K_(481)、K_(598)、R_(728)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))。采用定点突变和Gibson拼接法,分别成功构建了4种含有2个突变位点(L_(754)和N_(787))、4个突变位点(I_(309)、K_(481)、F_(753)和D_(944))、6个突变位点(I_(309)、K_(481)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))和8个突变位点(I_(309)、K_(481)、K_(598)、R_(728)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))的PRSV-LM全长c DNA侵染性克隆突变体:p Gprsvm~2、p Gprsvm4、p Gprsvm6和p Gprsvm8。经人工接种、病症观察和RT-PCR检测,4种突变体克隆均能系统性侵染非转基因番木瓜植株,除克隆p Gprsvm~2的病症表现与亲本强毒株PRSV-LM一致外,其他多位点突变的克隆p Gprsvm4、p Gprsvm6和p Gprsvm8在番木瓜植株上的病症严重程度出现依次减弱,而克隆p Gprsvm8的病症最弱,且延迟2周发病。本实验初步验证了6个氨基酸突变位点(I_(309)→S、K_(481)→Q、K_(598)→E、F_(753)→L、R_(728)→I和D_(944)→N)与PRSV-LM的病症表现及致病力相关,其中K_(598)→E和R_(728)→I可能是影响致病性的关键位点。
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| 关 键 词： | 番木瓜环斑病毒 弱毒株 定点突变 交叉保护 |
The Construction and Analysis of the Attenuated Mutants for Cross Protection Against PRSV |
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| FU Lanlan,TUO Decai,SHEN Wentao,YAN Pu,LI Xiaoying and ZHOU Peng.The Construction and Analysis of the Attenuated Mutants for Cross Protection Against PRSV[J].Chinese Journal of Tropical Crops,2016,37(12):2366-2375. |
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| Authors: | FU Lanlan TUO Decai SHEN Wentao YAN Pu LI Xiaoying and ZHOU Peng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Papaya ringspot virus Attenuated mutants Site-directed mutagenesis Cross protection |
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