| 实用WSSV定量检测方法的建立及其应用于脊尾白虾病毒感染规律的研究 |
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| 引用本文： | 李新苍,周俊芳,房文红,董建波,朱磊,王元.实用WSSV定量检测方法的建立及其应用于脊尾白虾病毒感染规律的研究[J].水产学报,2012,36(10):1554-1562. |
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| 作者姓名： | 李新苍 周俊芳 房文红 董建波 朱磊 王元 |
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| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室,上海200090
2. 江苏省海洋渔业指挥部,江苏南通,226006 |
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| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2011M07);国家自然科学基金青年基金项目(31101920) |
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| 摘 要： | 为优化当前白斑综合征病毒( WSSV)定量检测方法,实验结合当前WSSV诊断与定量方法应用的实际,试图通过设计两对普通PCR引物来建立一种实用的WSSV绝对定量方法,并利用此方法进一步探明WSSV在脊尾白虾体内的增殖规律及致病性.首先根据WSSV的囊膜蛋白VP28基因序列设计了两对特异引物(F1,R1)和(RF2,RR2),分别用于标准品质粒的构建和扩增子的扩增,以开展SYBR Green染料法定量检测WSSV的研究；随后利用该定量检测方法分析了WSSV在脊尾白虾体内的组织分布及感染规律.研究结果显示:(1)以定量引物RF2和RR2建立的SYBR Green绝对定量检测方法具有敏感度高、特异性强、定量范围广且准确等特点；(2)WSSV能感染脊尾白虾鳃、肝胰腺、肌肉、头胸甲下结缔组织、胃及肠等组织,其中头胸甲下结缔组织病毒含量最高(1.1×107 copies/μg),其次是鳃组织(4.1×106copies/μg)；正常脊尾白虾感染WSSV,首先经过一个约48 h潜伏期,而后开始大量增殖并造成部分虾死亡,死亡率约为20％.
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| 关 键 词： | 脊尾白虾 白斑综合征病毒 检测与定量 感染规律 |
| 收稿时间： | 5/20/2012 9:40:18 PM |
| 修稿时间： | 7/16/2012 7:46:30 PM |
Development and application of an economical real-time PCR for WSSV detection and quantification in ridgetail white prawns(Exopalaemon carinicauda) |
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| LI Xin-cang,ZHOU Jun-fang,FANG Wen-hong,DONG Jian-bo,ZHU Lei and WANG Yuan.Development and application of an economical real-time PCR for WSSV detection and quantification in ridgetail white prawns(Exopalaemon carinicauda)[J].Journal of Fisheries of China,2012,36(10):1554-1562. |
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| Authors: | LI Xin-cang ZHOU Jun-fang FANG Wen-hong DONG Jian-bo ZHU Lei and WANG Yuan |
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| Institution: | 1(1.Key Laboratory of East China Sea and Oceanic Fishery Resources Exploitation,Ministry of Agriculture, East China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Shanghai 200090,China; 2.The Headquarters of Oceanic Fishery of Jiangsu Province,Nantong 226006,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Exopalaemon carinicauda white spot syndrome virus(WSSV) absolute quantification virus distribution and proliferation pattern |
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