| 利用正交设计优化烟草SRAP反应体系 |
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| 引用本文： | 陈万胜,王元英,罗成刚,杨爱国,蒋彩虹,范静苑.利用正交设计优化烟草SRAP反应体系[J].分子植物育种,2008,6(1):177-182. |
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| 作者姓名： | 陈万胜 王元英 罗成刚 杨爱国 蒋彩虹 范静苑 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院烟草研究所,青岛,266101 |
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| 基金项目： | 国家烟草专卖局资助项目
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基本科研业务费专项 |
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| 摘 要： | 利用正交设计L16(45)对烟草SRAP-PCR反应体系的五因素(Taq酶,Mg2 模板DNA,dNTP,引物)在四个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件SPSS V13.0分析,得出如下结论:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;筛选出各反应因素的最佳水平,建立烟草SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq酶1.0 U,Mg2 1.5 mmol/L,模板DNA 30.00～120.00 ng,dNTP0.1 mmol/L,引物0.40 μmol/L.最后,应用烟草SRAP-PCR最佳反应体系对PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选,得出SRAP-PCR扩增以52℃退火温度、35个循环次数为最佳.这一优化系统的建立为今后利用SRAP标记技术对烟草进行基础研究提供了一个标准化的程序.
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| 关 键 词： | 烟草 SRAP 正交设计 优化 利用 正交 设计优化 烟草 SRAP 反应体系 Orthogonal Design Based System 扩增程序 标准化 研究 标记技术 优化系统 退火温度 循环次数 温度及 应用 最佳 筛选 |
Optimization for SRAP-PCR System of Tobacoo Based on Orthogonal Design |
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| Chen Wansheng,Wang Yuanying,Luo Chenggang,Yang Aiguo,Jang Caihong,Fan Jingyuan.Optimization for SRAP-PCR System of Tobacoo Based on Orthogonal Design[J].Molecular Plant Breeding,2008,6(1):177-182. |
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| Authors: | Chen Wansheng Wang Yuanying Luo Chenggang Yang Aiguo Jang Caihong Fan Jingyuan |
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| Institution: | Chen Wansheng Wang Yuanying Luo Chenggang Yang Aiguo Jang Caihong Fan Jingyuan Tobacco Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences,Qingdao,266101 |
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| Abstract: | In this paper, the orthogonal design was used to optimize SRAP-PCR amplification system on tobacoo (N. tabacum L.) in four levels of five factors (Taq DNA polymerase, Mg2+, DNA template, dNTP, and primer) respectively. The data generated by SRAP-PCR were analyzed by software SPSS V13.0, and the results showed that the effects of each factor in different levels were found and the quantity of Taq DNA polymerase was the most dominant factor affected on the result of PCR. A most suitable SRAP-PCR system for tob... |
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| Keywords: | Nicotiana tabacum L SRAP Orthogonal design Optimization |
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