| CRISPR/Cas9靶向敲除番茄SNAC4/9突变体的构建、鉴定及分析 |
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| 引用本文： | 冯源,刘烨方,寇晓虹,薛照辉.CRISPR/Cas9靶向敲除番茄SNAC4/9突变体的构建、鉴定及分析[J].核农学报,2023,37(2):217-229. |
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| 作者姓名： | 冯源 刘烨方 寇晓虹 薛照辉 |
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| 作者单位： | 天津大学化工学院，天津 300350 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31871848) |
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| 摘 要： | NAC转录因子参与植物生长发育、果实色素积累、细胞壁形态形成和植株衰老等过程。为系统研究SNAC4(SlNAC48，基因ID:101247735)和SNAC9(SlNAC19，基因ID:101248665)在番茄成熟衰老进程中的精准功能，本试验设计SNAC4/9敲除靶点，通过重叠聚合酶链式反应（overlapping PCR）法构建单引导RNA(sgRNA)表达盒，采用金门分子克隆（golden gate）方法将单个或多个sgRNA表达盒组装至pYLCRISPR/Cas9载体。PCR和测序结果表明，SNAC4/9敲除载体构建成功，通过农杆菌转化法将编码Cas9蛋白和sgRNA的基因导入Micro-Tom番茄细胞，对阳性苗进行靶点和脱靶位点检测，结果表明番茄成功突变且未脱靶，通过鉴定T1代突变体进一步证明，CRISPR/Cas9基因编辑番茄的靶点在代际之间可以稳定遗传。与野生型相比，SNAC4/9敲除果实色素积累减少，成熟延迟，表明SNAC4/9在番茄果实成熟中发挥重要作用。本研究为进一步探究SNAC4/9调控番茄果实色素代谢和胞壁代谢机制提供了遗传材料和试验基础。
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| 关 键 词： | 番茄成熟 CRISPR/Cas9 基因敲除 SNAC4/9 |
| 收稿时间： | 2022-04-27 |
Construction,Identification and Analysis of CRISPR/Cas9 Targeted Knockout SNAC4/9 Mutant in Tomato |
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| FENG Yuan,LIU Yefang,KOU Xiaohong,XUE Zhaohui.Construction,Identification and Analysis of CRISPR/Cas9 Targeted Knockout SNAC4/9 Mutant in Tomato[J].Acta Agriculturae Nucleatae Sinica,2023,37(2):217-229. |
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| Authors: | FENG Yuan LIU Yefang KOU Xiaohong XUE Zhaohui |
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| Institution: | School of Chemical Engineering and Technology，Tianjin University，Tianjin 300350 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tomato ripening CRISPR/Cas9 gene knockout SNAC4/9 |
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