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| 对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌双重微流控荧光定量PCR快速检测技术的建立与应用 | |
| 作者姓名： | 李昊 张铭洋 于永翔 王印庚 张正 马翠萍 陈夫山 |
| 作者单位： | 青岛科技大学海洋科学与生物工程学院 山东 青岛 266042；中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 山东 青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 山东 青岛 266072;中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 山东 青岛 266073;青岛科技大学海洋科学与生物工程学院 山东 青岛 266043 |
| 摘 要： | 急性肝胰腺坏死病(AHPND)是对虾养殖过程中最常见、最严重的疾病，给对虾养殖造成重大经济损失。AHPND病原种类多、基因型复杂，现有的针对不同病原的检测技术目标导向较弱、检测成本高、时间消耗长，对虾健康养殖亟待开发AHPND的精准快速诊断技术。本研究针对AHPND病原体携带编码一种二元毒素pirA和pirB大型质粒的遗传共性，基于pirA和pirB基因设计特异性引物并建立微流控荧光定量PCR检测方法。该方法对致病基因pirA和pirB特异性强、灵敏度高，最低检测限分别为5.43×100和4.31×101 copies/μL，样品平均检测时间为26 min左右。为进一步评估该方法在实际应用中的准确性，以含有pirA和pirB毒性质粒的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行人工感染实验。结果表明，感染后的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃丝、肝胰腺、肠道和肌肉等组织随时间的推迟均能检测到pirA和pirB；从感染2 h的结果来看，pirB比pirA检出率更高。此外，致病因子pirA和pirB比toxR的检出率更高，更适合对AHPND致病原的检测。本研究建立的微流控荧光定量PCR检测的方法具有快速、灵敏、高通量、污染少、现场检测、一体化集成等优点。该技术不仅适用于实验室，更符合养殖基层的现场快速检测需求，为及早认知疾病发生风险和病害精准防控提供了新的技术手段与理论支撑。 |
| 关 键 词： | 急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 pirA pirB 微流控芯片 现场检测 |
| 收稿时间： | 2022/10/11 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/11/22 0:00:00 |
Establishment and application of dual microfluidic fluorescent quantitative PCR for rapid detection of Vibrio parahaemolyticus in shrimp hepatopancreatic necrosis |
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| Authors: | LI Hao ZHANG Mingyang YU Yongxiang WANG Yingeng ZHANG Zheng MA Cuiping CHEN Fushan |
| Institution: | School of Marine Science and Biological Engineering, Qingdao University of Science and Technology, Qingdao 266042, China; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao), Qingdao 266071, China;Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao), Qingdao 266072, China;Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao), Qingdao 266073, China; School of Marine Science and Biological Engineering, Qingdao University of Science and Technology, Qingdao 266043, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | AHPND Vibrio parahaemolyticus pirA pirB Microfluidic chip Field detection |
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