| 荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定 |
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| 引用本文： | 赵圣国,王加启,刘开朗,李旦,于萍,卜登攀.荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定[J].畜牧兽医学报,2010,41(6). |
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| 作者姓名： | 赵圣国 王加启 刘开朗 李旦 于萍 卜登攀 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京,100193;甘肃农业大学,动物科学技术学院,兰州,730070
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京,100193 |
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| 基金项目： | 北京市自然科学基金，动物营养学国家重点实验室自主研究课题(2004DA125184 |
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| 摘 要： | 本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究。
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| 关 键 词： | 瘤胃脲酶 分离纯化 活性电泳 蛋白质组 |
Isolation and Identification of Urease from the Rumen Content of Holstein Cows by a Culture-independent Strategy |
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| ZHAO Sheng-guo,WANG Jia-qi,LIU Kai-lang,LI Dan,YU Ping,BU Deng-pan.Isolation and Identification of Urease from the Rumen Content of Holstein Cows by a Culture-independent Strategy[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2010,41(6). |
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| Authors: | ZHAO Sheng-guo WANG Jia-qi LIU Kai-lang LI Dan YU Ping BU Deng-pan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LC-MS/MS |
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