| 重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究 |
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| 引用本文： | 康小燕,蒋志伟,郁磊,羊扬,舒燕,姚丰华,朱国强.重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究[J].中国兽医学报,2011,31(3). |
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| 作者姓名： | 康小燕 蒋志伟 郁磊 羊扬 舒燕 姚丰华 朱国强 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省属高校自然科学重大基础研究项目，科技部转基因生物新品种培育重大专项 |
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| 摘 要： | 以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamH Ⅰ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M).通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响.结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变.突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失.生长曲线的测定结果表明,与舍pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢.以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC084-hok/sok(M).重组质粒pAqCYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性.
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| 关 键 词： | hok/sok基因 PSK 重组质 |
Construction and instability of the recombinant plasmid pACYC184-hok/sok |
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| KANG Xiao-yan,JIANG Zhi-wei,YU Lei,YANG Yang,SHU Yan,YAO Feng-hua,ZHU Guo-qiang.Construction and instability of the recombinant plasmid pACYC184-hok/sok[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2011,31(3). |
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| Authors: | KANG Xiao-yan JIANG Zhi-wei YU Lei YANG Yang SHU Yan YAO Feng-hua ZHU Guo-qiang |
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