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| 猪瘟病毒EO蛋白的高效表达及其间接ELISA检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 吴素丽,孙惠玲,钱永华.猪瘟病毒EO蛋白的高效表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].动物医学进展,2009,30(8). |
| 作者姓名： | 吴素丽 孙惠玲 钱永华 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵,712100;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,100097 2. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,100097 3. 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵,712100 |
| 基金项目： | 北京市科技新星计划项目(2006B42) |
| 摘 要： | Trizol法提取猪瘟兔化弱毒株(C株)总RNA,根据GenBank中E0基因序列设计特异性引物,扩增克隆E0基因,插入原核表达载体pET-32a(+),转化进BL2l(DE3)内进行表达。将表达的重组pET-E0蛋白通过His亲和层析柱纯化,以纯化后的蛋白为诊断抗原,包被96孔聚乙烯平板,通过探索抗原包被量和血清稀释倍数,建立检测猪瘟E0抗体的ELISA方法。通过对蛋白表达条件和ELISA反应条件的优化,确定E0蛋白能在BL2l(DE3)内高效表达,表达量达30%,蛋白分子质量约为50 ku,且蛋白以可溶性形式存在。纯化后蛋白浓度为2 mg/mL;抗原最适包被量为300 ng;血清最适稀释度为1∶50。经阻断试验、交叉反应试验和与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合性(83%)试验证明,建立的E0-ELISA简便、特异、稳定,为研制开发E2标记疫苗的应用和推广提供配套的检测方法。 |
| 关 键 词： | 猪瘟病毒 E0 原核表达 间接ELISA |
High Expression of CSFV E0 Protein and Establishment of an Indirect ELISA for Detection of Antibodies |
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| WU Su-li,SUN Hui-ling,QIAN Yong-hua.High Expression of CSFV E0 Protein and Establishment of an Indirect ELISA for Detection of Antibodies[J].Progress In Veterinary Medicine,2009,30(8). | |
| Authors: | WU Su-li SUN Hui-ling QIAN Yong-hua |
| Institution: | 1.College of Veterinary Medicine;Northwest A&F University;Yangling;Shaanxi;712100;China;2.Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine;Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences;Beijing;100097;China |
| Abstract: | |
| Keywords: | CSFV E0 gene prokaryotic expression indirect ELISA |
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