| 2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较 |
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| 引用本文： | 周忠涛,王小敏,汪伟,茅爱华,温立斌,倪艳秀,何孔旺.2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较[J].农业科学与技术,2015(1). |
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| 作者姓名： | 周忠涛 王小敏 汪伟 茅爱华 温立斌 倪艳秀 何孔旺 |
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| 作者单位： | 1. 江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014; 南京农业大学动物医学院，江苏南京210095
2. 江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31302071)；公益性行业(农业)科研专项(201303046)；江苏省自主创新项目(CX(14)2045)；江苏省第四期"333高层次人才培养工程"(第二层次)资助项目(BRA2012194)。@@@@Supported by National Natural Science Foundation of China，Special Fund for Agro-scientific Research in the Public lnterest，Jiangsu Agricultural Science and Technology lnnovation Fund (CX，"333 High-level Personnel Training Project"of Jiangsu Province |
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| 摘 要： | 目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）的定量检测。方法]设计合成2组特异性引物和 TaqMan探针，构建分别包含 PCV2 ORF1和 ORF2基因全长的重组质粒作为标准品，经过反应体系和反应条件的优化，绘制标准曲线，建立2种检测PCV2的分别基于 PCV2 ORF1和 ORF2的TaqMan荧光定量PCR方法。结果]所建立的2条标准曲线的 Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系，相关系数 R均在0.99以上，扩增效率均在90%~110%；重复性好，组内变异系数均小于5%；特异性强，以猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为模板时均无扩增；敏感性高，ORF1方法可达1.0×101 copies/μl，ORF2方法可达1.0×102 copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较，结果表明，其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致，有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测，证明这8份样品中确实存在 P1的感染。结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确，可用于PCV2的快速诊断和定量检测。
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| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 TaqMan荧光定量 ORF1 ORF2 类猪圆环病毒因子 P1 |
Establishment and Comparison of Two TaqMan Real-time PCR Methods for PCV2 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCV2 TaqMan real-time PCR ORF1 ORF2 PCV2-like factor P1 |
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