| 鸡β-防御素-1cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 张辉华,毕英佐,曹永长,马静云.鸡β-防御素-1cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达[J].畜牧兽医学报,2005,36(8):767-772. |
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| 作者姓名： | 张辉华 毕英佐 曹永长 马静云 |
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| 作者单位： | 1. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642;佛山科技学院生命科学院,佛山,528231
2. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642 |
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| 基金项目： | 广东省科技攻关计划项目（2002821404）;广东省科技攻关计划重大项目（2004A20106001） |
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| 摘 要： | 从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA，经过反转录PCR（RT-PCR）扩增出鸡β-防御素-1（Gallinacin-1，Gal-1）cDNA，将扩增产物与pGEM—T Easy载体相连，经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp，与报道的Gal—1cDNA编码区碱基序列完全相同。分析核苷酸序列表明Gal-1与火鸡异嗜性白细胞肽-1（Turkey heterophil peptides，THP-1）具有85．4％同源性。氨基酸序列方面Gal-1与THP-1同源性最高，为72．7％。将Gal-1基因成熟肽片段插入到酵母表达载体pPIZα-C，构建重组表达载体pPICZα-C-gal-1，电转入表达宿主菌X-33，Zeocin抗性筛选重组菌株。挑取阳性菌株经甲醇诱导表达，Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4．5ku位置出现预期条带。对其抗菌活性检测发现具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性。反相高效液相色谱表明阳性菌株表达产物与标准品在层析柱中保留时间一致。
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| 关 键 词： | 鸡 β-防御素-1 克隆 毕赤酵母 表达 |
| 文章编号： | 0366-6964（2005）08-0767-06 |
| 收稿时间： | 2004-07-19 |
| 修稿时间： | 2004-07-19 |
The cDNA Fragment Cloning of Chicken β-defensin-1 and Its Expression in Pichia Pastoris |
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| ZHANG Hui-hua,BI Ying-zuo,CAO Yong-chang,MA Jing-yun.The cDNA Fragment Cloning of Chicken β-defensin-1 and Its Expression in Pichia Pastoris[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2005,36(8):767-772. |
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| Authors: | ZHANG Hui-hua BI Ying-zuo CAO Yong-chang MA Jing-yun |
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