| 家蚕Ssu72蛋白基因的克隆及序列与表达分析 |
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| 引用本文： | 刘立丽,杨巧红,吕正兵,聂作明,王丹,陈健,盛清,吴祥甫,张耀洲.家蚕Ssu72蛋白基因的克隆及序列与表达分析[J].蚕业科学,2012(3):442-448. |
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| 作者姓名： | 刘立丽 杨巧红 吕正兵 聂作明 王丹 陈健 盛清 吴祥甫 张耀洲 |
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| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所,浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划“863”项目(No.2011AA100603);浙江省教育厅科技项目(No.Y201122156) |
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| 摘 要： | Ssu72(suppressor of sua7-1 clone 2)蛋白的命名源于对酵母sua7-1基因突变的抑制作用,推测其在真核生物RNA聚合酶Ⅱ作用的转录过程中有重要功能。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到家蚕Ssu72蛋白基因(BmSsu72)的cDNA序列,利用生物信息学方法分析该基因ORF为579 bp,编码蛋白质含有192个氨基酸残基,具有完整的Ssu72保守结构域,三级结构包含9个α螺旋和4个β折叠,推测α螺旋和β折叠之间可能形成锌指结构。以家蚕蛹cDNA为模板PCR克隆到BmSsu72基因的完整ORF序列,通过构建载体pET-28a(+)-BmSsu72在大肠杆菌中表达并纯化了重组BmSsu72蛋白,进而利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。采用荧光定量PCR检测到BmSsu72基因随着家蚕的生长发育转录水平呈逐渐下降趋势,在卵期的转录水平最高,在蛾期的转录水平最低;该基因在5龄幼虫各组织中的转录水平以马氏管最高,卵巢和丝腺次之。Western blotting检测BmSsu72在家蚕5龄幼虫各个组织中均有表达,其中在丝腺中的表达水平最高。推测BmSsu72可能与家蚕丝腺的分泌相关。
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| 关 键 词： | 家蚕 Ssu72蛋白 基因克隆 序列特征 表达谱 荧光定量PCR 免疫印迹分析 |
Cloning,Sequence and Expression Analyses of BmSsu72 Gene of Silkworm,Bombyx mori |
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| LIU Li-Li YANG Qiao-Hong Lü Zheng-Bing NIE Zuo-Ming WANG Dan,CHEN Jian,SHENG Qing,WU Xiang-Fu ZHANG Yao-Zhou.Cloning,Sequence and Expression Analyses of BmSsu72 Gene of Silkworm,Bombyx mori[J].Acta Sericologica Sinica,2012(3):442-448. |
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| Authors: | LIU Li-Li YANG Qiao-Hong Lü Zheng-Bing NIE Zuo-Ming WANG Dan CHEN Jian SHENG Qing WU Xiang-Fu ZHANG Yao-Zhou |
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| Institution: | (Institute of Biochemistry,School of Life Science,Zhejiang Sci-Tech University,Zhejiang Provincial Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomedicine,Hangzhou 310018,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bombyx mori Ssu72 protein Gene cloning Sequence feature Expression Profile Fluorescence quantitative PCR Western blotting |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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