| 罗非鱼无乳链球菌的DIG-cfb原位杂交检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 可小丽,曾祖聪,刘志刚,曹建萌,方伟,袁伟,卢迈新.罗非鱼无乳链球菌的DIG-cfb原位杂交检测方法的建立[J].中国农学通报,2015,31(35):66-72. |
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| 作者姓名： | 可小丽 曾祖聪 刘志刚 曹建萌 方伟 袁伟 卢迈新 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广东省水生动物疫病预防控制中心,中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系专项资金“罗非鱼链球菌病综合防控技术研究”(CARS-49)；农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室开放课题“ScpB诱导前后罗非鱼体内天然免疫相关基因的时空表达研究”(KF201309)。 |
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| 摘 要： | 为建立一种批量检测罗非鱼无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的快速敏感的原位杂交方法,本研究依据罗非鱼无乳链球菌cfb基因序列,选取其132-599 bp之间的序列为靶序列,采用PCR法制备了特异性地高辛标记的DNA探针DIG-cfb(Digoxigenin-labelled cfb probe,430 bp),同时对所制备的探针进行了测序鉴定及特异性和敏感性检测。结果表明,探针测序序列与实际Gen Bank序列相符,所制备的DIG-cfb探针与无乳链球菌基因组杂交呈阳性,与患病罗非鱼的其他细菌病原(嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、类志贺邻单胞菌以及海豚链球菌)基因组,以及与无乳链球菌亲缘关系较近的链球菌其他种(牛源链球菌、变异链球菌),斑点反应则均为阴性,d NTP对照组也为阴性,表明该方法特异性强;该方法可实现对批量样品的快速检测,具有较高的灵敏度,可检测无乳链球菌基因组的下限为1.5 ng/μL DNA。对采集于广东、海南及广西等不同地点的无乳链球菌样品,均可获得较明显的斑点反应圈,对患链球菌病的罗非鱼肝、脑组织基因组也可特异的检测出无乳链球菌。表明本研究建立的DIG-cfb原位杂交法对无乳链球菌基因组的检测具有快速、特异、敏感等特点,适合罗非鱼无乳链球菌的批量检测。
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| 关 键 词： | 无乳链球菌 cfb基因 PCR 地高辛标记探针 原位杂交 |
| 收稿时间： | 2015/6/26 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2015/11/6 0:00:00 |
Construction of Digoxigenin-labeled cfb in Situ Hybridization Method of Streptococcus agalactiae from Tilapia |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Streptococcus agalactiae cfb gene PCR digoxigenin-labelled probe in situ hybridization |
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