| 生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸 |
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| 引用本文： | 程安春,廖永洪,汪铭书,袁桂萍,徐超,韩晓英,郭宇飞.生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸[J].中国兽医学报,2009,29(4). |
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| 作者姓名： | 程安春 廖永洪 汪铭书 袁桂萍 徐超 韩晓英 郭宇飞 |
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| 作者单位： | 1. 四川农业大学,动物科技学院,禽病防治研究中心,四川,雅安,625014;四川省动物疫病与人类健康重点实验室,四川,雅安,625014
2. 四川农业大学,动物科技学院,禽病防治研究中心,四川,雅安,625014 |
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| 基金项目： | 教育部新世纪优秀人才支持计划，四川省攻关重大生物技术基金，四川省重点建设学科基金 |
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| 摘 要： | 据GenBank中有关鸭瘟病毒(DPV)的1个765 bp的EcoRⅠ片段序列,用Oligo软件设计长度为37 bp的寡核苷酸并用生物素标记制备探针,经blast分析和斑点杂交检测探针的特异性后,建立从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法并对人工感染死亡鸭的各组织器官进行检测,结果显示:(1)寡核苷酸探针能特异性检测到DPV强毒CHv株DNA,对鸭病毒性肝炎病毒QL79株RNA、血清1型鸭疲里默氏杆菌DNA、鸭源多杀性巴氏杆菌DNA、鸭沙门菌DNA和大肠杆菌DNA的检测结果为阴性.(2)以寡核苷酸探针建立的从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法的最佳反应条件为:组织切片先用0.2 mol/L HCl 37℃处理20 min,然后用100 mg/L的蛋白酶K 37℃消化15 min左右;杂交时探针工作浓度为350 μg/L;Avidin-AP的工作稀释度为1:100.(3)以所建立的原位杂交法检测DPV-CHv强毒人工感染死亡鸭的各组织器官,结果肝脏、肠道、法氏囊、脾脏、食道、肺脏和肾脏呈阳性反应,DPV的DNA分布于特定细胞的细胞浆和细胞核.结果表明,原位杂交检测石蜡切片中DPV的方法具有直观、特异性强的优点,是对DPV进行检测和病原定位的良好方法,可用于DPV的侵染过程和致病机理研究及回顾性诊断检测.
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| 关 键 词： | 鸭瘟强毒 原位杂交 检测 分布 |
Studies on the in situ detection of duck plague virus nucleic acid in paraffin section by biotin labelled oligo nucleotide probe |
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| CHENG An-chun,LIAO Yong-hong,WANG Ming-shu,YUAN Gui-ping,XU Chao,HAN Xiao-ying,GUO Yu-fei.Studies on the in situ detection of duck plague virus nucleic acid in paraffin section by biotin labelled oligo nucleotide probe[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2009,29(4). |
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| Authors: | CHENG An-chun LIAO Yong-hong WANG Ming-shu YUAN Gui-ping XU Chao HAN Xiao-ying GUO Yu-fei |
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