| 小鼠转录因子STAT1真核表达质粒的构建及生物学功能分析 |
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| 引用本文： | 韩凯凯,赵冬敏,毕可然,章丽娇,刘青涛,刘宇卓,黄欣梅,杨婧,李银.小鼠转录因子STAT1真核表达质粒的构建及生物学功能分析[J].江苏农业学报,2019,35(1). |
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| 作者姓名： | 韩凯凯 赵冬敏 毕可然 章丽娇 刘青涛 刘宇卓 黄欣梅 杨婧 李银 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014;江苏省农业科学院兽医研究所/ 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京,210014 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家重点研发计划 |
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| 摘 要： | 本研究以小鼠组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到小鼠信号转导子和转录激活子1(STAT1)基因完整开放阅读框的碱基序列,然后将其克隆到真核表达载体p DsRed-N1中,构建p DsRed-N1-STAT1重组质粒。测序成功的真核质粒转染至BHK-21细胞,通过α干扰素(IFN-α)分子刺激,检测细胞中STAT1分子的活化状态与定位,最终通过坦布苏病毒刺激,荧光显微镜检测STAT1分子的细胞内定位。结果表明,小鼠的STAT1基因开放阅读框为2 250 bp,编码749个氨基酸。同源性比对结果表明,小鼠STAT1与人、大鼠、猪、马等哺乳动物STAT1氨基酸序列的一致性分别为92%、97%、91%、91%。转染结果表明,构建的p DsRed-N1-STAT1真核表达质粒在BHK-21细胞中成功表达,无IFN-α刺激时,红色荧光只在BHK-21细胞的细胞质中出现,而加入IFN-α后,红色荧光则大多分布于细胞核内。用坦布苏病毒感染细胞后,红色荧光多分布于细胞质中。说明,构建的真核质粒p DsRed-N1-STAT1在哺乳动物细胞中能够正确表达融合蛋白质Red-STAT1,而且在IFN-α刺激下,Red-STAT1可由细胞质向细胞核转运,同时发现,坦布苏病毒感染能够有效抑制STAT1分子的核转运。
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| 关 键 词： | 小鼠 信号转导子和转录激活子1 α干扰素 |
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