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| 产过敏素的耐氨固氮工程菌的构建 | |
| 引用本文： | 朱红惠,赵立平,李艳琴,邱晓莹,丘元盛.产过敏素的耐氨固氮工程菌的构建[J].农业生物技术学报,2001,9(1):89-91. |
| 作者姓名： | 朱红惠 赵立平 李艳琴 邱晓莹 丘元盛 |
| 作者单位： | 1. 山西大学；广东省微生物研究所 2. 山西大学 3. 广东省微生物研究所, |
| 基金项目： | 国家自然科学基金（39770509），山西省攻关项目（991073），广东省科学基金（A990017） |
| 摘 要： | 阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae)E26(pMC73A）是带有耐氨质粒的固氮工程菌。本研究通过三亲杂交的方法将带有梨火疫病菌hrp基因簇的重组粘粒pCPP430导入E26(pMC73A)。接合子在番茄叶片上出现也对照DH5（pCPP430）一样典型的过敏反应症状，而出发菌E26(pMC73A)测 没有过敏反应；从接合子抽提到2条质粒DNA带，一条与pCPP430位置相同，大小约50kb，另一条与pMC73A位置相同，大小约7kb；接合子质粒DNA的酶切图谱正好是pCPP430和pMC73A酶切图谱的叠加；用地高辛标亡的hrpN DNA上进行Southerm hybridization分析，在接合子的质粒酶切产物中得到预期的杂交带，而出发菌E26（pMC73A）无任何杂交信号。通过质粒抽提、酶切验证、Southern hybridization分析以及在番茄叶片上的过敏反应测定、均表明生产植物抗性诱导蛋白的耐氨固氮工程菌构建成功。 |
| 关 键 词： | 过敏素 耐氨 固氮工程菌 |
| 修稿时间： | 2000年7月3日 |
Construction of the Ammonium Resistant Nitrogen-Fixing Engineering Strain Producing Harpin |
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| Abstract: | The plasmid pCPP430 harboring the functional hrp gene clusterof Erwinia amylovora was transformed by tri-parental mating into Enterobacter cloacae E26(pMC73A)which can fix nitrogen under relatively high ammonia concentrations.The transconjugants induced hypersensitive response when infiltrated into leaves of tomato.Two plasmids were isolated from the transconjugants and shown to have same physical map as that of pCPP430 plus pMC73A.Southern hybridization of this plasmid DNA with Dig-labeled hrpN DNA as probe revealed the presence of hrpN in the transconjugants.Thus,bioassay and molecular evidences demonstrated the successful construction of a bi-plasmid recombinant strain,which was capable of prouducing harpin. |
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