| 禽白血病病毒衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在鸡肝癌细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 何倩,沈逵,秦爱建,钱琨.禽白血病病毒衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在鸡肝癌细胞中的表达[J].中国家禽,2021(3):16-21. |
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| 作者姓名： | 何倩 沈逵 秦爱建 钱琨 |
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| 作者单位： | 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室;扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;扬州大学比较医学研究院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2017YFD0500700、2016YFD0500800);国家自然科学基金项目(31772734、32072839);江苏高校优势学科建设工程资助项目 |
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| 摘 要： | 为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染至HEK293T细胞,包装获得表达p27基因的重组慢病毒。将慢病毒上清感染293T和LMH细胞,检测细胞中p27基因的转录水平和蛋白表达水平。结果显示:重组质粒pLVX-p27构建正确,收集的慢病毒上清滴度为9×104TU/mL;实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆,p27基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内随着感染时间延长逐渐升高。研究表明:表达p27基因的慢病毒包装成功,并且能感染293T及禽源LMH细胞,为进一步研究P27的生物学功能提供了工具。
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| 关 键 词： | ALV P27 慢病毒载体构建 蛋白表达 |
Construction of Avian Leukemia Virus Capsid Protein P27 Lentiviral Vector and its Expression in Chicken Liver Cancer Cells |
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| HE Qian,SHEN Kui,QIN Aijian,QIAN Kun.Construction of Avian Leukemia Virus Capsid Protein P27 Lentiviral Vector and its Expression in Chicken Liver Cancer Cells[J].China Poultry,2021(3):16-21. |
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| Authors: | HE Qian SHEN Kui QIN Aijian QIAN Kun |
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| Institution: | (Key Laboratory for Avian Preventive Medicine,Ministry of Education,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu 225009;Key Laboratory of Jiangsu Preventive Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu 225009;Jiangsu Co-innovation Centre for the Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses,Yangzhou,Jiangsu 225009;Institute of Comparative Medicine,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu 225009) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ALV P27 lentiviral vector construction identification protein expression |
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