| 猪德尔塔冠状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 杜倩,汪伟,韩知晓,孔子荣,辛佳亮,闭璟珊,曹亮,孙文超,胡传活,郑敏.猪德尔塔冠状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用[J].中国动物传染病学报,2021(2):15-21. |
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| 作者姓名： | 杜倩 汪伟 韩知晓 孔子荣 辛佳亮 闭璟珊 曹亮 孙文超 胡传活 郑敏 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院;广西壮族自治区动物疫病控制中心;军事科学院军事兽医研究所;温州大学病毒学研究所 |
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| 基金项目： | 广西自然科学基金项目(2012GXNSFAA053073);浙江省青年基金项目(LQ19C180001);温州市基础性科研项目(N20190005,N20180010)。 |
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| 摘 要： | 为建立一种猪德尔塔病毒(PDCoV)的快速检测方法,本研究根据NCBI公布的PDCoV序列设计了1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增PDCoV的S基因,将其连接至pMD19-T载体上,以构建正确的重组质粒作为标准品,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了验证分析。结果显示:该检测方法在标准品浓度为6.26×101~6.26×108copies/μL范围内呈良好线性关系,其相关性为0.999,斜率为-4.312;灵敏度良好,检测下限可达6.26×101copies/μL;特异性良好,对PEDV和TGEV两种猪常见病原均无特异性扩增;重复性好,组内和组间变异系数均小于2.0%;利用该方法对43份临床样品进行检测,PDCoV阳性率为4.6%。结果表明,本研究成功建立了PDCoV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,为PDCoV快速灵敏的诊断奠定了坚实基础。
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| 关 键 词： | 猪德尔塔冠状病毒 S基因 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR |
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