| Collimonas sp.ZL261蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学特性 |
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| 引用本文： | 李洁琼,张殿朋,卢彩鸽,吴慧玲,于莉,刘伟成.Collimonas sp.ZL261蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学特性[J].核农学报,2014(8). |
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| 作者姓名： | 李洁琼 张殿朋 卢彩鸽 吴慧玲 于莉 刘伟成 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学农学院;北京市农林科学院植物保护环境保护研究所; |
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| 基金项目： | 北京市自然科学基金项目(6101001);北京市科技计划课题(Z121100001212002);北京市农林科学院科技创新基金(No.KJCX201101001) |
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| 摘 要： | 分离自西藏色季拉山海拔4530 m高山草甸土壤的山冈单胞菌(Collimonas sp.)ZL261代谢产物具有很高的蛋白酶活性,为了明确其蛋白酶种类及其作用特点,本文采用限制性内切酶法构建了菌株ZL261的基因组文库,利用透明圈法筛选其胞外蛋白酶活性克隆,对其基因及蛋白结构进行了分析,进一步研究了该酶的表达和酶学特性。结果表明:该蛋白酶基因(命名为capro)包含一个长为1092 bp的完整开放阅读框(GenBank:KF992845),其编码蛋白由363个氨基酸组成;序列比对和同源性分析结果显示,该氨基酸序列与食真菌山冈单胞菌(Collimonas fungivorans)Ter331胞外蛋白酶序列(NC015856)相似性最高,为83%;一级、二级和三级结构分析均显示该蛋白含M35金属蛋白酶家族(EC 3.4.24.20)保守结构域。蛋白酶基因在大肠杆菌DH5α中异源表达获得了约38 kDa的目的蛋白。ZL261粗酶液对金属蛋白酶抑制剂EDTA敏感,最适作用pH值为7,最适温度30℃,在10℃时仍保持70%以上酶活力。综合分析可知,该蛋白酶为中性低温金属蛋白酶。具有较好的开发应用潜能。研究结果为微生物蛋白酶的开发提供了新型种质资源,也为探求不同生境微生物蛋白酶的系统进化关系提供了基础信息。
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| 关 键 词： | 山冈单胞菌 蛋白酶 基因 克隆与表达 |
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