| 柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 王艳歌,董辉,韩红玉,赵其平,朱顺海,李榴佳,吴有陵,黄兵.柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定[J].中国动物传染病学报,2014(2):65-71. |
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| 作者姓名： | 王艳歌 董辉 韩红玉 赵其平 朱顺海 李榴佳 吴有陵 黄兵 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31272557) |
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| 摘 要： | 为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella Lactate dehydrogenase,EtLDH)的真核表达质粒,分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板,PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因,PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ,并能在真核细胞中表达,为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 柔嫩艾美耳球虫 乳酸脱氢酶 IFN-γ基因 293T细胞 真核表达 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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