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| 家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆、表达及定位 | |
| 引用本文： | 孙京臣,戴伟君,谭玉蓉,杨艺峰,张勤奋,徐兴耀,张景强.家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆、表达及定位[J].农业生物技术学报,2005,13(2):202-206. |
| 作者姓名： | 孙京臣 戴伟君 谭玉蓉 杨艺峰 张勤奋 徐兴耀 张景强 |
| 作者单位： | 1. 中山大学生命科学院生物防治国家重点实验室,广州,510275;华南农业大学动物科学学院,广州,510642 2. 中山大学生命科学院生物防治国家重点实验室,广州,510275 3. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金结构生物学倾斜项目(No.370169)和国家"十五"科技攻关项目(No.2001BA502B01-02-03)资助. |
| 摘 要： | 应用分段RT-PCR的方法从家蚕质多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedmsis virus,BmCPV）中国株的dsRNA中成功地克隆了RDRP基因(RNA-dependent RNA polymerase),基因序列全长3691bD,并登录GenBank,序列号为AY496445。利用质粒载体pET-28b成功地构建了表达质粒pET28b-RDRP,并用IPTG诱导的方法在大肠杆菌(Escherichia coil)BL21（DE3)中获得表达,分子量约为138kD。以重组蛋白的兔抗为一抗,15mm山羊抗兔IgG-胶体金为二抗,进行免疫标记,电镜定位,结果显示在病蚕中肠的柱状细胞的游离病毒粒子和多角体内的病毒粒子上均能结合胶体金颗粒,标记率为35％左右,证明BmCPV病毒的RDRP复合物确实位于病毒衣壳上。 |
| 关 键 词： | 家蚕质多角体病毒 RDRP 克隆 定位 GenBank RT-PCR 病毒粒子 virus dsRNA BmCPV CPV病毒 mori 基因序列 表达质粒 质粒载体 大肠杆菌 IPTG 重组蛋白 免疫标记 柱状细胞 病毒衣壳 胶体金 中国株 序列号 分子量 标记率 复合物 |
| 修稿时间： | 2004年4月2日 |
Cloning, Expression and Location of the RNA-dependent RNA Polymerase Gene from Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus |
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| SUN Jing-chen,DAI Wei-jun,TAN Yu-rong,YANG Yi-feng,ZHANG Qin-Fen,XU Xing-yao,ZHANG Jing-qiang.Cloning, Expression and Location of the RNA-dependent RNA Polymerase Gene from Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2005,13(2):202-206. | |
| Authors: | SUN Jing-chen DAI Wei-jun TAN Yu-rong YANG Yi-feng ZHANG Qin-Fen XU Xing-yao ZHANG Jing-qiang |
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