| 东方粘虫中肠V-ATP酶a亚基的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 金 朵,王高振,吴元元,吴文君,祁志军.东方粘虫中肠V-ATP酶a亚基的克隆及原核表达[J].西北农业学报,2018,27(6):915-922. |
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| 作者姓名： | 金 朵 王高振 吴元元 吴文君 祁志军 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学植物保护学院农药研究所;陕西省植物源农药研究与开发重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31371958）；杨凌示范区科技计划（2017NY-09）。 |
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| 摘 要： | 对东方粘虫Mythimna separata(Walker)]中肠V-ATPase a亚基(MS-VATPa)cDNA全长序列进行克隆、原核表达及纯化研究。采用RT-PCR和RACE技术克隆MS-VATPa基因,再亚克隆于原核表达载体pET-22b(+)以构建重组载体pET22b-MS-VATPa,将鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,采用Ni-NTA柱亲和层析法纯化目标蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot验证。结果表明:成功克隆东方粘虫中肠MS-VATPa基因的cDNA全长序列,并实现MS-VATPa基因在大肠杆菌原核表达系统中的可溶性表达。
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| 关 键 词： | 东方粘虫 昆虫V-ATP酶 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 |
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