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| EIAV基因转移载体的优化 | |
| 引用本文： | 尹岚岚,韩凌霞,李亚明,司昌德,于海波,徐佳,曲连东,冉多良.EIAV基因转移载体的优化[J].中国预防兽医学报,2008,30(3):183-189. |
| 作者姓名： | 尹岚岚 韩凌霞 李亚明 司昌德 于海波 徐佳 曲连东 冉多良 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001 3. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100 4. 新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052 |
| 摘 要： | 本研究在马传染性贫血病毒（EIAV）基因转移载体pcPPTPRE（＋）的基础上含有报告基因增强绿色荧光蛋白（EGFP）和人乙型肝炎病毒转录后调控元件（HARE）1，对其转录后调控元件和外源基因启动子进行优化。参考土拨鼠肝炎病毒（Woodchuck hepatitis virus，WHV）基因组序列和人巨细胞病毒增强子／鸡B—actin启动子序列（CAGp），设计合成2对引物，分别扩增WHV转录后调控元件（WARE）和CAGp片段，正向插入pcPPTPRE（＋）获得重组质粒pcPPTWARE和pcPPTWCAG。将获得的EIAV转移载体pcPPTWARE和pcPPTWCAG以及pcPPTPRE（＋），脂质体法分别转染人胚肾细胞HEK293和鸡胚成纤维细胞系DF-1，转染后12h、24h、36h、48h在荧光显微镜下观察特异性绿色荧光的表达。48h后收获细胞，利用流式细胞仪检测转染细胞中表达EGFP的阳性细胞。结果表明，在HEK293细胞中pcPPTWARE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均极显著高于pcPPTPRE（＋）（P〈0．01），pcPPTWCAG显著高于pcPPTWARE（P〈0．05）；pcPPTWCAG的平均道数值极显著高于pcPPTPRE（＋）和pcPPTWARE，pcPPTWPRE显著高于pcPPTPRE（＋）。在DF-1细胞中pcPPTWARE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均显著高于pcPPTPRE（＋），而pcPPTWARE和pcPPTWCAG的平均道数值均极显著高于pcPPTPRE（＋），pcPPTWCAG显著高于pcPPTWARE。本研究利用WARE和CAGp优化构建了EIAV基因转移载体pcPPTWCAG，获得了较强的基因表达能力，为以鸡为宿主进行转基因研究提供了条件。 |
| 关 键 词： | 马传染性贫血病毒 CAG启动子 WPRE 基因转移载体 绿色荧光蛋白 EIAV 基因研究 转移载体 优化构建 equine infectious anemia virus derived vector gene transfer 条件 宿主 表达能力 数值 百分率 结果 阳性细胞 转染细胞 流式细胞仪检测 利用 绿色荧光 镜下观察 |
| 文章编号： | 1008-0589（2008）03-0183-07 |
| 收稿时间： | 2007-01-23 |
| 修稿时间： | 2007年1月23日 |
Improvement of gene transfer vector derived from equine infectious anemia virus |
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| YIN Lan-lan,HAN Ling-xia,LI Ya-ming,SI Chang-de,YU Hai-bo,XU Jia,QU Lian-dong,RAN Duo-liang.Improvement of gene transfer vector derived from equine infectious anemia virus[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2008,30(3):183-189. | |
| Authors: | YIN Lan-lan HAN Ling-xia LI Ya-ming SI Chang-de YU Hai-bo XU Jia QU Lian-dong RAN Duo-liang |
| Abstract: | |
| Keywords: | CAG promoter equine infection anemia virus gene transfer vector EGFP |
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