| 转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化 |
| |
| 引用本文： | 常丽娟,梁晋刚,宋君,刘文娟,付成平,代晓航,王东,魏超,熊梅.转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化[J].作物学报,2023(7):1818-1828. |
| |
| 作者姓名： | 常丽娟 梁晋刚 宋君 刘文娟 付成平 代晓航 王东 魏超 熊梅 |
| |
| 作者单位： | 1. 四川省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所;2. 农业农村部科技发展中心;3. 四川省农业科学院遥感与数字农业研究所 |
| |
| 基金项目： | 四川省自然科学基金(面上)项目“2022NSFSC0140”； |
| |
| 摘 要： | 转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法。根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5’端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列, 3’端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240bp的玉米基因组序列。针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3’端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法, PCR产物片段大小为166 bp。经过测试,该方法的检出限为0.1%,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段。国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用。ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑。
|
| 关 键 词： | 转基因玉米 ND207 旁侧序列 转化事件特异性 定性PCR |
|
|
